色谱柱使用寿命的因素

　　1、流动相

　　在以水溶液为流动相时，水溶液中的微生物例如细菌容易生长，当用水溶液或有机酸缓冲液保护柱子时，一些霉菌可能在色谱柱中滋生，堵塞固定相颗粒间的空隙。由于湿法填充技术的问世，目前普遍使用的色谱柱填料直径一般都小于10um，流动相中的颗粒杂质很容易先沉积在柱头然后慢慢堵塞柱子。流动相的pH值对色谱柱也有影响，特别是对化学键合硅胶填料，水溶液的pH适范围在2~7.5之间，当pH>8时，硅胶会释出生成絮状物堵塞柱子，且难以复原，柱效很快降低，甚至完全失效。当在缓冲液中加入有机溶剂例如甲醇或乙腈时，盐类的溶解度下降，会析出盐沉淀，堵塞柱子。同时流动相中的有机溶剂和盐会腐蚀色谱柱头的筛板，产生柱头凹陷。流动相的极性对柱子也有一定影响，对于硅胶柱，甲醇、水、冰乙酸等极性较大物质会破坏填料，反之，对于化学键合硅胶，极性小的物质如正丁醇、二氯甲烷等也起同样的作用。碱性溶液会破坏阳离子交换树脂色谱柱，而酸性溶液容易损坏阴离子交换树脂柱。

　　2、样品和固定相

　　如果有少量或微量的样品不能够溶解在流动相中，在通过固定相会堵塞柱子。样品中的颗粒杂质也会堵塞柱子。样品组分例如糖、蛋白质等通过柱子时会产生不可逆吸附，这样固定相的活性点被覆盖。样品组分还会与固定相产生反应，尤其是对于氨基柱的影响较为严重，因为氨基易与酐、酮形成希夫（Schiff）缩合而减少活性点，使保留时间缩短。色谱柱键合相基团脱落、固定相分解和活性基团变性以及会影响柱效和保留时间的显著改变。大多数键合相都是通过硅氧硅键（Si-O-Si）连接在硅基质上，形成带有有机基团的固定相Si-O-Si-R（R为CnH2n+1），硅氧硅键可能在水溶液中水解而断裂，使键合基团脱落。