有关液相色谱仪的系统组成介绍

　　液相色谱仪系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。

　　储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相；

　　被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数；

　　在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别；

　　被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪；

　　数据以图谱形式打印出来高效液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统；

　　下面将分别叙述其各自的组成与特点。

　　进样系统

　　一般采用隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作，进样量是恒定的。

　　这对提高分析样品的重复性是有益的。

　　输液系统

　　该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。

　　高压泵的一般压强为47～44X10Pa，流速可调且稳定，当高压流动相通过层析柱时；

　　可降低样品在柱中的扩散效应，可加快其在柱中的移动速度；

　　这对提高分辨率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的。

　　流动相贮存器和梯度仪，可使流动相随固定相和样品的性质而改变；

　　包括改变洗脱液的极性、离子强度、PH值，或改用竞争性抑制剂或变性剂等。

　　这就可使各种物质（即使仅有一个基团的差别或是同分异构体）都能获得有效分离。

　　分离系统

　　该系统包括色谱柱、连接管和恒温器等。

　　色谱柱一般长度为10～50cm（需要两根连用时，可在二者之间加一连接管）；

　　内径为2～5mm，由优质不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等材料制成；

　　住内装有直径为5～10μm粒度的固定相（由基质和固定液构成）。

　　固定相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶构成；

　　它们都有惰性（如硅胶表面的硅酸基因基本已除去）、多孔性（孔径可达1000？）和比表面积大的特点；

　　加之其表面经过机械涂渍（与气相色谱中固定相的制备一样）；

　　或者用化学法偶联各种基因（如磷酸基、季胺基、羟甲基、苯基、氨基或各种长度碳链的烷基等）或配体的有机化合物。

　　因此，这类固定相对结构不同的物质有良好的选择性。

　　例如，在多孔性硅胶表面偶联豌豆凝集素（PSA）后，就可以把成纤维细胞中的一种糖蛋白分离出来。

　　另外，固定相基质粒小，柱床极易达到均匀、致密状态，极易降低涡流扩散效应。

　　基质粒度小，微孔浅，样品在微孔区内传质短。这些对缩小谱带宽度、提高分辨率是有益的。

　　根据柱效理论分析，基质粒度小，塔板理论数N就越大。

　　这也进一步证明基质粒度小，会提高分辨率的道理。

　　再者，高效液相色谱的恒温器可使温度从室温调到60C；

　　通过改善传质速度，缩短分析时间，就可增加层析柱的效率。